【公開日：2024.07.25】【最終更新日：2024.06.12】
課題データ / Project Data
課題番号 / Project Issue Number
23OS0020
利用課題名 / Title
マイクロエマルション含有液体サンプルの透過型電子顕微鏡観察
利用した実施機関 / Support Institute
大阪大学 / Osaka Univ.
機関外・機関内の利用 / External or Internal Use
外部利用/External Use
技術領域 / Technology Area
【横断技術領域 / Cross-Technology Area】（主 / Main）計測・分析/Advanced Characterization（副 / Sub）-
【重要技術領域 / Important Technology Area】（主 / Main）マルチマテリアル化技術・次世代高分子マテリアル/Multi-material technologies / Next-generation high-molecular materials（副 / Sub）次世代バイオマテリアル/Next-generation biomaterials
キーワード / Keywords
電子顕微鏡/ Electronic microscope,DDSマテリアル/ DDS material,高機能ハイドロゲル/ Highly functional hydrogel
利用者と利用形態 / User and Support Type
利用者名（課題申請者）/ User Name (Project Applicant)
(浅田 尚紀) 安藤 千穂
所属名 / Affiliation
小林製薬㈱
共同利用者氏名 / Names of Collaborators in Other Institutes Than Hub and Spoke Institutes
櫛間 翠
ARIM実施機関支援担当者 / Names of Collaborators in The Hub and Spoke Institutes
光岡 薫 ,梶村 直子
利用形態 / Support Type
（主 / Main）機器利用/Equipment Utilization（副 / Sub）,技術代行/Technology Substitution
利用した主な設備 / Equipment Used in This Project
報告書データ / Report
概要（目的・用途・実施内容）/ Abstract (Aim, Use Applications and Contents)
スフィンゴイド塩基と脂肪酸がアミド結合した構造を有するセラミドは、水に難溶性であるため、製剤化が難しいという課題を有している。そのため、水溶性のベシクルなどとして配合する技術が研究され報告されている。今回我々は、ポリオール、非イオン性界面活性剤などを組み合わせることで、セラミドを1%含有する可溶化液を調製した。エマルジョンの調剤スケールによる形態の違いを確認するため、スケール違いで調剤したサンプルのナノレベルの形態を透過型電子顕微鏡により観察する。本課題では、cryo-EMによる直接観察で形態の違いをcryo-EMで確認した。
実験 / Experimental
Cryo-EM用グリッドの作製には、急速凍結装置（FEI製Vitrobot MarkIV）を用い、温度22℃、湿度100％の制御下で液体エタンによる浸漬法を用いた。膜穴グリッド（Quantifoil社,）は酢酸エチルで洗浄後、イオン・コーター（真空デバイス社、PIB-10）で浸水化処理した。試料はそのままの濃度とで3µL使用した。膜穴グリッドに滴下後ろ紙で10秒ブロットすることにより、石鹸膜様の薄膜を膜穴に保持し、直ちに液体エタンで凍結した。 観察はクライオ電子顕微鏡Titan Krios（FEI社）を加速電圧300kVで行い、画像撮影はFalcon IIカメラ（FEI社）を用いて倍率22,500倍で行った。撮影にはEPU software(FEI社)を使用し、低電子線照射条件で行った。
結果と考察 / Results and Discussion
サンプルは、調剤スケールの違いに関わらず、透過型電子顕微鏡像を得ることができた。 得られたエマルションの像は、バラつきはあるものの50nm前後であった。事前に別途測定していた平均粒子径は30nm前後であったこととも近い結果が得られた。 今回、我々が調整したセラミド1%含有可溶化液において、調剤スケールによるエマルジョンの形態に違いがないことを確認できた。
図・表・数式 / Figures, Tables and Equations
その他・特記事項（参考文献・謝辞等） / Remarks(References and Acknowledgements)
成果発表・成果利用 / Publication and Patents
論文・プロシーディング（DOIのあるもの） / DOI (Publication and Proceedings)
口頭発表、ポスター発表および、その他の論文 / Oral Presentations etc.
特許 / Patents
特許出願件数 / Number of Patent Applications：0件
特許登録件数 / Number of Registered Patents：0件