【公開日：2024.07.25】【最終更新日：2024.05.22】
課題データ / Project Data
課題番号 / Project Issue Number
23NM0180
利用課題名 / Title
RGD含有ペプチドの結合するインテグリンサブタイプの解析
利用した実施機関 / Support Institute
物質・材料研究機構 / NIMS
機関外・機関内の利用 / External or Internal Use
外部利用/External Use
技術領域 / Technology Area
【横断技術領域 / Cross-Technology Area】（主 / Main）物質・材料合成プロセス/Molecule & Material Synthesis（副 / Sub）-
【重要技術領域 / Important Technology Area】（主 / Main）次世代バイオマテリアル/Next-generation biomaterials（副 / Sub）-
キーワード / Keywords
ペプチド, センサーチップ,表面プラズモン共鳴装置/ Surface plasmon resonance,細胞培養デバイス/ Cell Culture Device
利用者と利用形態 / User and Support Type
利用者名（課題申請者）/ User Name (Project Applicant)
山田 雄二
所属名 / Affiliation
東京薬科大学 薬学部
共同利用者氏名 / Names of Collaborators in Other Institutes Than Hub and Spoke Institutes
ARIM実施機関支援担当者 / Names of Collaborators in The Hub and Spoke Institutes
李香蘭
利用形態 / Support Type
（主 / Main）機器利用/Equipment Utilization（副 / Sub）-
利用した主な設備 / Equipment Used in This Project
報告書データ / Report
概要（目的・用途・実施内容）/ Abstract (Aim, Use Applications and Contents)
利用者は独自のインテグリン結合性細胞接着ペプチドを有している。しかし、当該ペプチドが種々のインテグリンサブタイプにどの程度の親和性を有しているのかについては明らかになっていない。そこで、 表面プラズモン共鳴装置により当該ペプチドの各インテグリンサブタイプに対するKD値を促成することを目的とし、機器利用を実施した。
実験 / Experimental
各サブタイプのインテグリンは組換えタンパク質であり、His tagを有している。そこで、NTAセンサーチップを使ってインテグリンをリガンドとしてキャプチャーし、アナライトとして当該ペプチドの結合を解析できるのかについて検証した。また、CM5センサーチップにEDC/NHSを使ってインテグリンを固定化し当該ペプチドの結合を解析できるのかについても検証を行った。
結果と考察 / Results and Discussion
NTAセンサーチップを用いた場合、キャプチャーした直後には6000RUを超えるインテグリンの固定化が見られたものの、次第に右肩下がりにRU値が減少してしまい、アナライトの結合によるRU値の変化を解析することが難しかった。これはNTAとHis tagの結合が不安定であるためであると考え、CM5センサーチップを用いてインテグリンを共有結合で固定化することにした。CM5への固定化においても6000RUの固定化を得ることができた。しかし、アナライトによるRU値の変化を適切に観察することはできなかった。その原因として、200kDa以上の分子量を持つインテグリンと1kDa以下のペプチドの結合を解析するには分子量の差が大き過ぎることが一つ考えられる。また、インテグリンの組換え体が、本当に細胞上のインテグリンと同様にペプチドと結合できているのかどうかについても疑問が残る。
図・表・数式 / Figures, Tables and Equations
その他・特記事項（参考文献・謝辞等） / Remarks(References and Acknowledgements)
Liu Y, et al. J Biomol Screen. 2010. PMID: 20086207
成果発表・成果利用 / Publication and Patents
論文・プロシーディング（DOIのあるもの） / DOI (Publication and Proceedings)
口頭発表、ポスター発表および、その他の論文 / Oral Presentations etc.
特許 / Patents
特許出願件数 / Number of Patent Applications：0件
特許登録件数 / Number of Registered Patents：0件