【公開日：2024.07.25】【最終更新日：2024.06.22】
課題データ / Project Data
課題番号 / Project Issue Number
23NU0261
利用課題名 / Title
β―グルグロ二ターゼの酵素活性測定
利用した実施機関 / Support Institute
名古屋大学 / Nagoya Univ.
機関外・機関内の利用 / External or Internal Use
外部利用/External Use
技術領域 / Technology Area
【横断技術領域 / Cross-Technology Area】（主 / Main）計測・分析/Advanced Characterization（副 / Sub）-
【重要技術領域 / Important Technology Area】（主 / Main）次世代バイオマテリアル/Next-generation biomaterials（副 / Sub）-
キーワード / Keywords
酵素活性, 蛍光強度,バイオセンサ/ Biosensor
利用者と利用形態 / User and Support Type
利用者名（課題申請者）/ User Name (Project Applicant)
森 賢一郎
所属名 / Affiliation
愛知県農業総合試験場
共同利用者氏名 / Names of Collaborators in Other Institutes Than Hub and Spoke Institutes
ARIM実施機関支援担当者 / Names of Collaborators in The Hub and Spoke Institutes
加藤 剛志
利用形態 / Support Type
（主 / Main）機器利用/Equipment Utilization（副 / Sub）-
利用した主な設備 / Equipment Used in This Project
報告書データ / Report
概要（目的・用途・実施内容）/ Abstract (Aim, Use Applications and Contents)
植物組織にゲノム編集因子を導入するため、前段階としてレポーターであるβ―グルグロ二ターゼ（GUS）遺伝子を用いて物理的手法により導入し、導入条件を検討した。導入条件の検討ではβ―グルグロ二ターゼ（GUS）の酵素活性を算出し、導入効率を評価した。
実験 / Experimental
β―グルグロ二ターゼ（GUS）遺伝子搭載のベクターDNAを予め導入した植物サンプルを用いて、植物体内で発現したGUSに対して基質である4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucopyranoside （4-MUG）を添加し、酵素反応させた。その生成物である4-メチルウンベリフェロン(4-MU)の蛍光強度を測定した。その際、蛍光りん光分光光度計(Fluoromax-4P)を使用し、励起波長は365nm、発光波長は448nmで測定した。物理的手法による導入強度について”強”と”弱”で設定し、２つの導入強度に対してベクターDNAの濃度を０µg/µl、１µg/µl、２µg/µlで導入した。各サンプル数は導入強度が”弱”で各ベクターDNA濃度について５ずつ、”強”で３ずつとした。同一の導入強度間でベクターDNAの各濃度における蛍光強度ついて比較を行った。平均値の有意差についてはTukey法による多重比較検定を行い、有意差があれば、酵素活性を算出する。
結果と考察 / Results and Discussion
導入強度が”強”（Fig. 1）及び”弱”（Fig. 2）で共に蛍光強度について、ベクターDNA濃度０µg/µl（コントロール）と比較して１µg/µl及び
２µg/µlで有意差はなかった。そのため、酵素活性は未検出であった。結果から物理的手法での導入効率が良くないことや導入できていない可能性が高いと考えられた。
図・表・数式 / Figures, Tables and Equations
Fig.1 導入強度”強”でのDNA濃度別蛍光強度
Fig.2 導入強度”弱”でのDNA濃度別蛍光強度
その他・特記事項（参考文献・謝辞等） / Remarks(References and Acknowledgements)
成果発表・成果利用 / Publication and Patents
論文・プロシーディング（DOIのあるもの） / DOI (Publication and Proceedings)
口頭発表、ポスター発表および、その他の論文 / Oral Presentations etc.
特許 / Patents
特許出願件数 / Number of Patent Applications：0件
特許登録件数 / Number of Registered Patents：0件