【公開日：2024.07.25】【最終更新日：2024.04.16】
課題データ / Project Data
課題番号 / Project Issue Number
23NM0036
利用課題名 / Title
甲状腺ホルモンシグナル伝達経路に影響をおよぼす分子の探索
利用した実施機関 / Support Institute
物質・材料研究機構 / NIMS
機関外・機関内の利用 / External or Internal Use
外部利用/External Use
技術領域 / Technology Area
【横断技術領域 / Cross-Technology Area】（主 / Main）計測・分析/Advanced Characterization（副 / Sub）-
【重要技術領域 / Important Technology Area】（主 / Main）次世代バイオマテリアル/Next-generation biomaterials（副 / Sub）-
キーワード / Keywords
培養細胞,質量分析/ Mass spectrometry
利用者と利用形態 / User and Support Type
利用者名（課題申請者）/ User Name (Project Applicant)
大崎 芳典
所属名 / Affiliation
筑波大学 医学医療系
共同利用者氏名 / Names of Collaborators in Other Institutes Than Hub and Spoke Institutes
ARIM実施機関支援担当者 / Names of Collaborators in The Hub and Spoke Institutes
竹村太郎,服部晋也
利用形態 / Support Type
（主 / Main）技術補助/Technical Assistance（副 / Sub）-
利用した主な設備 / Equipment Used in This Project
報告書データ / Report
概要（目的・用途・実施内容）/ Abstract (Aim, Use Applications and Contents)
甲状腺のシグナル伝達異常による，非自己免疫性甲状腺機能亢進症の原因遺伝子として，TSH受容体シグナル伝達経路を担う，TSH受容体の恒常活性変異やGsαの恒常活性変異が広く知られている．その一方で，これら以外の原因分子の異常についてはほとんど知られていない．今回，甲状腺ホルモンシグナル伝達経路に影響をおよぼす分子の探索のために，cAMPの産生に影響を及ぼすと考えられる分子に結合するタンパクを網羅的に解析するために，免疫沈降とLC-MS/MSを組み合わせて解析を実施した．
実験 / Experimental
TSH受容体シグナル伝達経路において，cAMP産生に影響を及ぼすことがわかっているタンパクを，FLAGタグをN末につけてN-thy ori 3-1細胞に過剰発現させた．この細胞からcell lysateを回収し，anti-FLAG magnetic beadsを用いて免疫沈降を行い，沈降したサンプルをゲル電気泳動を行い，CBB染色の結果認められたバンドを切り出して，バンドの分子量毎にLC-MS/MSで解析を行い，結合したタンパクを網羅的に同定した．
結果と考察 / Results and Discussion
事前にin silico解析にて低分子量Gタンパクの結合が予測されていたが，結合タンパクの一覧にRan-GTPaseが検出された．その他の低分子量GタンパクでLC-MS/MS解析にて結合タンパクとして同定されたものはなかった．Ran-GTPaseは既報のTSH受容体シグナル伝達経路内での役割については報告がない分子であり，他の分野では主に癌細胞を含め細胞増殖に関わっている分子とされている．今後は，Ran-GTPaseがTSH受容体シグナル伝達経路において担う役割について解析を進めていく予定である．
図・表・数式 / Figures, Tables and Equations
その他・特記事項（参考文献・謝辞等） / Remarks(References and Acknowledgements)
今回，LC-MS/MSを用いた解析におきまして，サンプル調整・機器操作・結果の解析を通じてご指導を頂きました，竹村太郎先生と服部晋也先生に深く感謝申し上げます．
成果発表・成果利用 / Publication and Patents
論文・プロシーディング（DOIのあるもの） / DOI (Publication and Proceedings)
口頭発表、ポスター発表および、その他の論文 / Oral Presentations etc.
特許 / Patents
特許出願件数 / Number of Patent Applications：0件
特許登録件数 / Number of Registered Patents：0件